基础研究
自然杀伤细胞的体外扩增及对卵巢上皮性癌细胞杀伤作用的实验研究
中华妇产科杂志, 2017,52(08) : 545-550. DOI: 10.3760/cma.j.issn.0529-567X.2017.08.008
摘要
目的

探讨自然杀伤(NK)细胞的体外扩增及对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞的杀伤作用。

方法

(1)NK细胞的体外扩增及表型鉴定:收集2015年11月北京大学人民医院1名健康志愿者捐赠的外周血20 ml,分离外周血淋巴细胞,采用转染后过度表达白细胞介素21(IL-21)的慢性髓系白血病细胞系K562细胞(IL-21-K562细胞)作为饲养细胞(经放射线照射),与外周血中分离的淋巴细胞混合培养,体外诱导、扩增培养14 d,监测扩增过程中淋巴细胞数量和存活细胞比例的变化,14 d后收获扩增的淋巴细胞并计数,采用流式细胞仪鉴定扩增的淋巴细胞中NK细胞比例(其表型为CD3-CD56+)。(2)NK细胞对卵巢癌细胞的杀伤作用:效应细胞(即NK细胞)与靶细胞(即卵巢癌细胞系SKOV3、HOC1A、3AO、CAOV3细胞及其对照K562细胞和正常卵巢上皮细胞系T29细胞)的比值(效靶比)分别为50∶1、20∶1、10∶1、5∶1、1∶1,采用乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测NK细胞对卵巢癌细胞的杀伤作用。

结果

(1)NK细胞的体外扩增及表型鉴定结果:体外诱导、扩增培养14 d,淋巴细胞数从扩增当天(第0天)的2.0×107个至第14天时为5.1×109个,扩增后淋巴细胞数增加至扩增前的255倍;存活细胞比例从扩增当天的95%以上降至第8天的80%左右,随后逐渐升高,至第14天时又达95%以上。扩增前、后表型为CD3-CD56+的NK细胞占CD3-的非T淋巴细胞总数的比例分别为2.33%、85.32%,占总淋巴细胞数的比例分别为1.06%、69.42%,扩增前、后分别比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。(2)NK细胞对卵巢癌细胞的体外杀伤率:LDH释放实验显示,NK细胞对卵巢癌SKOV3、HOC1A、3AO、CAOV3细胞及其对照K562细胞和T29细胞均有很强的杀伤作用,随着效靶比的增加其杀伤率均明显增高(P<0.01)。当效靶比为1∶1时,NK细胞对K562细胞的杀伤率为37%,而对卵巢癌细胞及T29细胞的杀伤率均在10%左右,分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05);当效靶比为50∶1和20∶1时,除CAOV3细胞(杀伤率>70%)以外,NK细胞对其他卵巢癌细胞及其对照K562、T29细胞的杀伤率均大于80%,各细胞间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。

结论

NK细胞能够在体外得到高效扩增,且其对卵巢癌细胞有良好的非特异性杀伤作用。

引用本文: 程洪艳, 叶雪, 马瑞琼, 等.  自然杀伤细胞的体外扩增及对卵巢上皮性癌细胞杀伤作用的实验研究 [J]. 中华妇产科杂志,2017,52( 08 ): 545-550. DOI: 10.3760/cma.j.issn.0529-567X.2017.08.008
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卵巢上皮性癌(卵巢癌)的发病率居妇科恶性肿瘤第2位,但病死率却居妇科恶性肿瘤首位,发现时多为晚期,具有难治性和易复发性,5年生存率在40%左右。除常规的手术和化疗之外,生物治疗在卵巢癌治疗中的作用越来越受到重视。本研究收集健康志愿者的外周血,在体外分离外周血淋巴细胞,诱导、扩增后产生高活性、高数量的自然杀伤(NK)细胞;并采用乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测NK细胞对卵巢癌细胞的体外杀伤作用,为NK细胞用于卵巢癌的临床治疗提供实验依据。

 
 
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免疫疗法,过继
天然杀伤细胞
卵巢肿瘤